超氧陰離子測試盒 

微量法100T/96S

注意：正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義：

生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導(dǎo)的作用，但積累過多時(shí)會(huì)對細(xì)胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞作用，導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。

測定原理：

超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2－，NO2－在對氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成紅色的偶氮化合物，在530nm處有特征吸收峰，根據(jù)ΔA值可以計(jì)算樣品中O2－含量，反應(yīng)式為NH2OH + 2O2－ ＋H＋ → NO2－ ＋ H2O2 ＋ H2O。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：液體110mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體15mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑三：液體15mL×1瓶，4℃避光保存。

試劑四：氯仿，自備。

超氧陰離子提取

1. 植物、動(dòng)物組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后，10000g，4℃，離心20min，取上清置于冰上待測。

2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心20min，取上清置于冰上待測。

3. 血清或培養(yǎng)液：直接測定。

測定操作表

1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至530nm。

2. 操作表

超氧陰離子含量計(jì)算公式

1. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0242x - 0.0027，R2=0.9980

1. 組織：

（1）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

超氧陰離子含量（nmol/g 鮮重）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×2

                             =148.76×(ΔA+0.0027)÷W

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ g·min）=148.76×(ΔA+0.0027)÷W÷T

                                =7.44× (ΔA+0.0027)÷W

（2）按照蛋白質(zhì)濃度計(jì)算

超氧陰離子含量（nmol/mg prot）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷(V樣×Cpr)×2

                                             =148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ mg prot·min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷Cpr÷T

                                      =7.44× (ΔA+0.0027)÷Cpr

2. 細(xì)菌，真菌：

超氧陰離子含量（nmol/104 cell）= (ΔA+0.0027)÷0.0242× V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)×2

= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/104 cell·min）= 148.76×(ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量÷T

=7.44× (ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量

3. 血清或培養(yǎng)液

超氧陰離子 含量（nmol/mL）= (ΔA+0.0027)÷0.0242×V反總÷V樣×2

=148.76× (ΔA+0.0027)

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/mL·min）= 148.76× (ΔA+0.0027) ÷T

= 7.44× (ΔA+0.0027)

V樣總：加入提取液體積，1 mL； V反總：反應(yīng)總體積，0.36mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.2mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min；2: 2分子O2－參與反應(yīng)生成1分子NO2－。

b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.0121x - 0.0027，R2 = 0.9980

1. 組織：

（1）按照樣本質(zhì)量計(jì)算

超氧陰離子含量（nmol/g 鮮重）= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V反總÷(V樣÷V樣總×W)×2

                             =297.52× (ΔA+0.0027)÷W

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ g·min）=297.52× (ΔA+0.0027)÷W÷T

                                =14.88× (ΔA+0.0027)÷W

（2）按照蛋白質(zhì)濃度計(jì)算

超氧陰離子含量（nmol/mg prot）= (ΔA+0.0027)÷0.0121×V反總÷(V樣×Cpr)×2

                                             =297.52× (ΔA+0.0027)÷Cpr

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/ mg prot·min）= 297.52× (ΔA+0.0027)÷Cpr÷T

                                      =14.88× (ΔA+0.0027)÷Cpr

2. 細(xì)菌，真菌：

超氧陰離子含量（nmol/104 cell）=(ΔA+0.0027)÷0.0121× V反總÷(V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量)×2

=297.52× (ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/104 cell·min）=297.52× (ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量÷T

=14.88× (ΔA+0.0027)÷細(xì)胞數(shù)量

3. 血清或培養(yǎng)液

超氧陰離子 含量（nmol/mL）=(ΔA+0.0027)÷0.0121 ×V反總÷V樣×2

=297.52×(ΔA+0.0027)

超氧陰離子產(chǎn)生速率（nmol/mL·min）= 297.52×(ΔA+0.0027) ÷T

=14.88×(ΔA+0.0027)

V樣總：加入提取液體積，1 mL； V反總：反應(yīng)總體積，0.36mL；V樣：反應(yīng)中樣品體積，0.2mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，20min；2：2分子O2－參與反應(yīng)生成1分子NO2－。

注意事項(xiàng)

1. OD值大于1，樣品適當(dāng)稀釋再測定，注意計(jì)算公式里乘以稀釋倍數(shù)。

2. 樣品制備好后，立刻進(jìn)行測定，請勿將樣品進(jìn)行長時(shí)間的低溫保存，以免影響測定結(jié)果。

3. 試劑四有一定的毒性，請操作時(shí)做好防護(hù)措施。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

2. 國外試劑的訂購?？商峁W美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購方案。

3. 提供加急物流處理，進(jìn)口貨物，最快交期1-2周。

4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù)。

5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點(diǎn)合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質(zhì)量保證，所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅(jiān)持“一站式"服務(wù)模式，為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開發(fā)需求。公司整合國際與國內(nèi)資源，加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè)，提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率，為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

7. 公司突出創(chuàng)新思維，提高工作效能，減低運(yùn)作成本，為客戶提供優(yōu)惠的價(jià)格。

超氧陰離子測試盒