多聚半乳糖醛酸酶(PG)測(cè)試盒

微量法100T/48S

注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義

多聚半乳糖醛酸酶（EC3.2.1.15）是一種細(xì)胞壁結(jié)合蛋白，可以催化果膠分子中α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解，參與果膠的降解，使細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)解體，導(dǎo)致果實(shí)軟化，與果實(shí)成熟、葉和花的脫落、病原物防御，細(xì)胞伸展發(fā)育以及木質(zhì)化有關(guān)，在植物抗病性和食品貯藏保鮮領(lǐng)域具有較高的研究?jī)r(jià)值。

測(cè)定原理

多聚半乳糖醛酸酶水解果膠酸生成半乳糖醛酸，具有還原性醛基，與DNS試劑反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì)，在540nm有特征吸收峰，測(cè)定540nm處吸光值變化可計(jì)算得多聚半乳糖醛酸酶活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制

提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：液體8mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體15mL×1瓶，4℃避光保存。

酶液提取

1．組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。16000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2．細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后16000g，4℃離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。

3．培養(yǎng)液：直接檢測(cè)。

測(cè)定操作表

酶活性計(jì)算公式

1. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 3.9642x - 0.008；R2 = 0.9996；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，mg/mL；y為吸光值。

1．按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每毫克蛋白每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。

PG活性（mg/h/mg prot）= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr

2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每克樣本每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。

PG活性（mg/h/g 鮮重）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷W

3．按液體體積計(jì)算

酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。

PG活性（mg/h/mL）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷V樣÷T=2.523×(ΔA+0.008)

4. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每104個(gè)細(xì)胞每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。

PG活性（mg/h/104cell）=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷細(xì)胞數(shù)量    

V反總：反應(yīng)總體積，0.15mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.03mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h

2. 用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.9821x - 0.008，R2 = 0.9996；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度，mg/mL；y為吸光值。

1．按照蛋白濃度計(jì)算

酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每毫克蛋白每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位。

PG活性（mg/h/mg prot）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷（V樣×Cpr）÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷Cpr

2．按照樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每克樣本每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位（U）。

PG活性（mg/h/g 鮮重）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷W

3．按液體體積計(jì)算

酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每毫升培養(yǎng)液每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位（U）。

PG活性（mg/h/mL）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷V樣÷T=5.045×(ΔA+0.008)

4. 按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活性定義：在40℃，pH6.0條件下，每104個(gè)細(xì)胞每小時(shí)分解果膠酸產(chǎn)生1mg半乳糖醛酸為一個(gè)酶活力單位（U）。

PG活性（mg/h/104cell）=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反總÷（V樣×細(xì)胞數(shù)量÷V樣總）÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷細(xì)胞數(shù)量

V反總：反應(yīng)總體積，0.15mL；V樣：反應(yīng)中樣本體積，0.03mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，0.5h

注意事項(xiàng)

煮沸樣本建議將樣本在沸水中煮沸10分鐘，以將酶滅活。

上海牧榮生物科技有限公司

1. 國(guó)內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷代理。

2. 國(guó)外試劑的訂購(gòu)?？商峁W美實(shí)驗(yàn)室品牌的采購(gòu)方案。

3. 提供加急物流處理，進(jìn)口貨物，最快交期1-2周。

4. 進(jìn)出口貨物代理服務(wù)。

5. 公司代理眾多有名生命科學(xué)領(lǐng)域的研究試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品品牌：CELL DATA,Alamanda Polymers， cstti，Click Chemistry tools，Nanoprobes，Ancell，NANOCS，Ambeed, Inc，SPEED BioSystems, LLC，Tulip Biolabs, Inc，Torrey Pines Biolabs，magsphere ,FabGennix International ,paratechs，Medicago,Oraflow,CWE,Wasatch Photonics, alphananote, It4ip, proteoform, Caprico等,重點(diǎn)合作品牌 Lee Biosolutions,chematech,Nanopartz,denovix,Atto tec,macrocyclics等。

6. 質(zhì)量保證，所有產(chǎn)品都提供售后服務(wù)。付款方式靈活。公司堅(jiān)持“一站式"服務(wù)模式，為客戶全面解決實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)、開(kāi)發(fā)需求。公司整合國(guó)際與國(guó)內(nèi)資源，加強(qiáng)網(wǎng)絡(luò)建設(shè)，提高公司內(nèi)部運(yùn)作效率，為客戶提供方便、快捷的服務(wù)。

7. 公司突出創(chuàng)新思維，提高工作效能，減低運(yùn)作成本，為客戶提供優(yōu)惠的價(jià)格。

多聚半乳糖醛酸酶(PG)測(cè)試盒